常規(guī)反相分析色譜柱進(jìn)行實(shí)際樣品分析的推薦步驟：

1. 確保流動相潔凈，每隔24-48小時(shí)就應(yīng)新配水相流動相，并同時(shí)更換或仔細(xì)清洗流動相溶劑瓶，以避免流動相長菌。確保實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)工作正常。

2. 確保樣品不含顆粒型雜質(zhì)。如樣品過臟，或有微粒存在，需要考慮適合的樣品制備方法。在使用樣品過濾器時(shí)，確保濾膜為0.22 μm，且與樣品溶劑完全兼容(不發(fā)生溶解)。也可考慮使用高速離心法去除顆粒性雜質(zhì)，例如8000 rpm轉(zhuǎn)速以上離心20分鐘后，移取樣品上清液進(jìn)樣。

3. 確保樣品溶液與流動相條件兼容，進(jìn)樣后不會發(fā)生沉淀、或溶劑不互溶情況。通常使用流動相或比流動相洗脫強(qiáng)度弱的溶液(即有機(jī)溶劑比例較低)溶解或稀釋樣品，這樣可以獲得更好的峰形和檢測靈敏度。

4. 如系統(tǒng)在線混合生成流動相，預(yù)先檢查流動相各組分的兼容性。例如，當(dāng)磷酸鹽緩沖液與高濃度乙腈(例如?70%)混用時(shí)，可能發(fā)生鹽析出。

5. 了解色譜柱的操作使用限度。如果所使用的流動相條件、柱溫、以及樣品溶液條件，不利于色譜柱壽命時(shí)，請使用保護(hù)柱以延長柱壽命。

6. 在使用流動相進(jìn)行柱平衡之前，如果流動相中含有可能析出的緩沖鹽，先使用5倍柱體積的有機(jī)溶劑-水溶液進(jìn)行過渡。例如，在使用40/60甲醇/磷酸鹽緩沖液流動相之前，先使用5倍柱體積的40/60甲醇/純水溶液沖洗色譜柱。

7. 在常規(guī)分析過程中，每針或間隔若干針清洗柱內(nèi)可能積累的污染物。完成分析后，徹底清洗色譜柱，除去柱內(nèi)緩沖鹽和污染物。

8. 在色譜柱使用過程中，定期進(jìn)行柱效測試，記錄塔板數(shù)與壓力，從而追蹤監(jiān)控色譜柱的性能變化。柱效測試方法應(yīng)固定。

9. 反相色譜柱應(yīng)保存于100%乙腈中。如色譜柱使用于高溫或極端PH條件，或停用色譜柱超過72小時(shí)，用100%乙腈保存色譜柱。

10. 使用原配的柱堵頭，確保堵頭擰緊以避免柱內(nèi)溶劑揮發(fā)。取放色譜柱時(shí)避免磕碰掉落。